“scRNA-seq”到底有多少方法？

1、單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組建庫(kù)方法分類目前單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組的建庫(kù)方法基本可以按照技術(shù)方案分為兩類：1）一類依賴于孔板通俗的說，就是將已經(jīng)解離的單個(gè)細(xì)胞分配到孔板中各自的孔中，在孔中單個(gè)細(xì)胞完成裂解、RNA富集、加細(xì)胞條碼(cellbarcode)和單分子識(shí)別碼(UMI)等步驟后再收集到一起進(jìn)行測(cè)序。而具體的實(shí)施方案會(huì)根據(jù)每種建庫(kù)方案有一些特色型的變動(dòng)。目前這一類方法包括CEL-seq、CEL-seq2、SMART-seq、SMART-seq2、Microwell-seq等。特點(diǎn):a.基于孔...

什么是熒光定量PCR?

實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real-timeqPCR）是指在PCR反應(yīng)中加入熒光基團(tuán)，通過連續(xù)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)出現(xiàn)的先后順序以及信號(hào)強(qiáng)弱的變化，即時(shí)分析目的基因的初始量的一種PCR技術(shù)。一、熒光化學(xué)物質(zhì)Real-timeqPCR所使用熒光化學(xué)物質(zhì)有熒光染料和熒光探針兩類。1、熒光染料目前主要使用的熒光染料是SYBRGreenI，SYBRGreenI是一種嵌入型花箐染料，在488nm（藍(lán)光）照射激發(fā)后，在522nm（綠光）具有發(fā)射高峰。SYBRGreenI是嵌在DNA螺旋的小溝里面的，一...

教你用熒光定量PCR儀？（ABI 7500）

打開電腦及儀器電源，雙擊電腦桌面上的7500software圖標(biāo)打開程序。圖片來源：網(wǎng)絡(luò)軟件主界面：圖片來源：7500/7500FastReal-TimePCRSystemGETTINGSTARTEDGUIDE實(shí)驗(yàn)設(shè)置：a.實(shí)驗(yàn)名稱b.儀器型號(hào)c.實(shí)驗(yàn)?zāi)康模憾俊enotyping(基因分型)、定性（有/無）d.定量類型：標(biāo)準(zhǔn)曲線、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線、相對(duì)定量e.實(shí)驗(yàn)方法：探針法、染料法f.模板類型：gDNA、cDNAg.Target設(shè)置：Target包括目的基因、內(nèi)參基因（多少...

PCR技術(shù)之父-凱利·穆利斯

部分友友還是搞不清楚PCR是個(gè)什么東西，搞不清楚為什么可以進(jìn)行基因擴(kuò)增，這一節(jié)我們就了解一下穆利斯與PCR技術(shù)的發(fā)現(xiàn)與發(fā)展。一、PCR的提出和發(fā)展1983年春天的一個(gè)周五晚上，穆利斯開車帶著女友前往鄉(xiāng)間度周末。在蜿蜒的鄉(xiāng)間公路上開著車，一段DNA反復(fù)復(fù)制的景像，在他的腦海里冒了出來。事實(shí)上，DNA復(fù)制起始于DNA的解鏈，只需要通過加熱讓雙鏈DNA變?yōu)閱捂淒NA，然后再添加和單鏈DNA末端相結(jié)合的引物DNA，這樣就開始了復(fù)制的過程，因此，只需要人為的給予其一些條件，就可以讓DN...

NanoDrop One/OneC的UV-Vis模塊檢測(cè)

UV-Vis檢測(cè)檢測(cè)原理UV-Vis應(yīng)用檢測(cè)的波長(zhǎng)范圍從190nm到850nm，可以檢測(cè)多達(dá)40個(gè)波長(zhǎng)的吸收光，吸光度顯示在屏幕上，并納入檢測(cè)報(bào)告。此模塊功能可用于檢測(cè)未知樣品，確定最佳吸收波長(zhǎng)，或者檢測(cè)擁有多個(gè)吸收峰的樣品。操作流程1、在“主頁(yè)”屏幕上，選擇用戶自定義選項(xiàng)卡，然后點(diǎn)擊UV-Vis；2、選定最多40個(gè)待監(jiān)測(cè)波長(zhǎng)（或者您也可以在檢測(cè)完成后，再選定波長(zhǎng)），以及是否使用自動(dòng)化光程調(diào)整、分析波長(zhǎng)和基線矯正；3、吸取2μL空白對(duì)照溶液滴加到基座上，降下檢測(cè)臂（或?qū)⒓尤肟?..

POCT質(zhì)譜的希望之旅

POCT質(zhì)譜的希望之旅自POCT概念出現(xiàn)之后，其給予了所有分散式檢驗(yàn)需求的用戶于充分的滿足，成為繼生化、免疫、分子診斷之后的第四個(gè)IVD賽道，并正在高速?zèng)_擊未來的IVD市場(chǎng)總量。POCT使得檢測(cè)工作從實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)散到任何有需求的實(shí)地場(chǎng)景，這也使得靈敏度、準(zhǔn)確度等一些指標(biāo)被弱化，但在新冠和呼吸道疾病“盛行”中的防治過程中，其作用貢獻(xiàn)已遠(yuǎn)超指標(biāo)弱化帶來的問題。不僅如此，這些年分子POCT、質(zhì)譜POCT及其他技術(shù)融合POCT產(chǎn)品井噴式出現(xiàn)，使得POCT的潛力進(jìn)一步被發(fā)現(xiàn)，如果解決了大部...

PCR程序設(shè)置和什么有關(guān)？影響大么？

PCR程序設(shè)置和什么有關(guān)？影響大么？一旦確定了合適的DNA起始量和PCR組分，就必須設(shè)定PCR循環(huán)和運(yùn)行參數(shù)，從而確保高效擴(kuò)增。DNA聚合酶的特點(diǎn)、PCR緩沖液的類型、模板DNA的復(fù)雜程度都會(huì)影響反應(yīng)條件的設(shè)置。1、起始高溫變性步驟在PCR起始階段，通常是在94–98℃下孵育1-3min將雙鏈DNA模板解離成單鏈，從而使引物可與目標(biāo)區(qū)域結(jié)合并開始延伸。此步的高溫條件使起始DNA變性，確保在第一個(gè)擴(kuò)增循環(huán)期間實(shí)現(xiàn)有效的目標(biāo)序列擴(kuò)增，此外也有助于使樣品中可能存在的熱不穩(wěn)定性蛋白酶...

教你使用NanoDrop One

一、基本儀器操作1、NanoDropOne主頁(yè)屏幕2、NanoDropOne檢測(cè)屏幕3、NanoDropOne常規(guī)操作二、檢測(cè)核酸（雙鏈DNA、單鏈DNA或RNA）開始使用NanoDropOne儀器進(jìn)行基座檢測(cè)之前，抬起儀器檢測(cè)臂然后清潔上下基座。至少需使用新的實(shí)驗(yàn)室無塵紙擦拭基座。1.在“主頁(yè)”屏幕上，選擇核酸選項(xiàng)卡并點(diǎn)擊雙鏈DNA、單鏈DNA或RNA，根據(jù)要檢測(cè)的樣品而定。2.將1-2μL空白檢測(cè)溶液移取到下基座，然后降下檢測(cè)臂。3.點(diǎn)擊空白檢測(cè)并等待檢測(cè)完成。如果自動(dòng)空...